《赛马娘四格》以可爱的赛马拟人化少女们的校园生活为背景展开。故事围绕着众多性格各异的赛马娘，像特别周，她元气满满、积极向上，总是带着满腔热情投入到训练和生活中；还有目白麦昆，实力强劲且有着傲娇的一面。在特雷森学园里，她们每天都会发生各种有趣的四格小趣事。比如特别周在食堂总是风卷残云般吃饭，让周围的同学目瞪口呆；目白麦昆在训练时偶尔会耍耍小脾气，但最终还是会认真完成训练。这些赛马娘们还会一起参加学园祭、运动会等活动，在欢笑与吵闹中，她们的友情不断加深，共同度过了一段段欢乐又难忘的时光。