《黑寡妇》故事承接《美国队长 3：内战》，娜塔莎·罗曼诺夫在被政府通缉的情况下，回到了自己的过去。她遭遇了来自妹妹叶莲娜·贝洛娃的挑战，叶莲娜受雇来杀她。原来，她们曾是红房训练出的杀手。红房是一个将女性训练成致命特工的组织，娜塔莎和叶莲娜都曾是那里的受害者。 娜塔莎和叶莲娜与曾经的“父母”梅丽娜和阿列克谢重聚，四人组成小队，共同对抗红房的头目德雷科夫。德雷科夫掌握着控制所有黑寡妇的关键，他利用一种名为“驯鹰者”的装置操纵着这些女特工。在战斗中，他们不仅要面对德雷科夫的手下，还要应对各种高科技武器和陷阱。最终，他们成功摧毁了“驯鹰者”，解放了所有被控制的黑寡妇。