《御姐在上》围绕职场御姐苏悦和职场新人林宇展开。苏悦在职场雷厉风行，能力出众，是众人眼中的女强人。林宇初入公司，怀揣梦想却经验不足。一次重要项目中，林宇负责的部分出了差错，差点导致项目失败。苏悦没有一味指责，而是耐心指导他解决问题。此后，林宇对苏悦心生敬佩，开始默默关注她。随着工作接触增多，两人关系逐渐拉近。然而，公司内部竞争激烈，有人嫉妒苏悦的成就，设计陷害她。林宇得知后，挺身而出，与苏悦一起查明真相，成功化解危机。在这个过程中，他们的感情也悄然发生变化，从上下级关系逐渐发展为相互欣赏、彼此依赖的恋人。