《笑林小子2：新乌龙院》充满欢乐与奇趣。乌龙院住持长眉师父（吴孟达 饰）某天迎来三名特殊的小徒弟，小文（郝劭文 饰）、小皮（葛民辉 饰）和小沙弥。小文是富豪父亲送来学武以保护传家宝珠的，小皮则是被黑道大哥托付照顾。与此同时，女贼小红（郑少秋 反串）和师兄（张卫健 饰）为盗取宝珠也潜入乌龙院。长眉师父带领徒弟们与女贼等人展开了一系列斗智斗勇的故事。寺院内，小徒弟们天真活泼又调皮捣蛋，闹出不少笑话，他们在学武过程中也状况百出。而小红和师兄的偷宝计划不断受挫，双方你来我往，笑料不断，最终正义战胜邪恶，乌龙院恢复往日平静。